在蛋白组学研究与生物制药开发中，蛋白纯度评估是确保实验可重复性和产品质量的核心环节。SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）与HPLC（高效液相色谱）是两种常用且互补的分析方法，各具优势与局限。本文聚焦于它们在蛋白纯度分析中的适用场景、核心技术特点及优缺点，助力科研人员研发决策。

一、SDS-PAGE：基于分子量的电泳分离

SDS-PAGE利用SDS赋予蛋白相似的负电荷密度，使其在凝胶中按分子量分离，呈现清晰条带。该技术具有以下特点：

• 操作简便，适用广泛：无需复杂前处理，适合多种蛋白样品。
• 结果直观，便于初筛：通过Coomassie蓝或银染显色，快速判断纯度及主要杂质。
• 成本低廉，设备要求低：适用于实验室日常检测及小规模样品分析。

然而，SDS-PAGE存在分辨率有限的问题，尤其在蛋白分子量相近或丰度悬殊的样品中。此外，其定量能力受限，染色效率和上样量均可能影响结果准确性。对于需高精度定量和低丰度杂质分析的应用，SDS-PAGE往往不足以胜任。

二、HPLC：基于理化性质的高分辨分离

HPLC依靠固定相与流动相的相互作用，实现蛋白混合物的高效分离。关键优势包括：

• 分辨率与灵敏度优异：可区分分子量相近或结构相似的蛋白，适应复杂生物样品。
• 高精度定量：结合紫外、荧光或质谱检测，实现蛋白组分的准确量化。
• 方法可扩展：通过优化色谱条件（如反相、离子交换、尺寸排阻），适应不同类型蛋白及分析需求。

HPLC的缺点主要包括对样品处理和仪器维护的严格要求，以及高成本投入。此外，某些蛋白在高压和有机溶剂环境下可能变性或丢失活性，需要针对性优化方案。

三、技术比较：根据需求选择最佳方案

在蛋白纯度分析中，选择SDS-PAGE还是HPLC需综合考虑样品复杂度、分析目的及精度要求：

• 科研初步筛选：当目标是快速评估纯度或优化表达条件，SDS-PAGE因其简单、直观而优势明显。
• 高标准纯度检测：在生物制药质量控制、蛋白药研发及申报阶段，HPLC以其高分辨率和定量能力，成为不可或缺的选择。
• 联合应用策略：在实际应用中，SDS-PAGE与HPLC往往协同使用。先通过SDS-PAGE进行粗略筛选，再以HPLC确认纯度和杂质成分，为实验设计和产品质量提供多维度数据支持。

蛋白纯度不仅关乎实验可重复性，更直接影响产品安全性与有效性。选择合适的纯度评估方法，不仅取决于样品复杂度与分析需求，也离不开专业技术平台的支撑。百泰派克生物科技致力于提供高质量的蛋白分析服务，依托先进的液相色谱系统与高分辨质谱平台，我们不仅能够实现复杂蛋白样品的高精度分离与定量，还可根据客户需求定制个性化分析方案。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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