产品说明 甘油三脂是植物油和动物脂肪的主要成分,是一种重要的能量来源和食物脂肪载体。在人体中,甘油三酸脂含量过高可能与动脉粥样硬化、心脏病或胰腺炎等疾病有关。在科研和药物研究中,方便、直接、自动化的甘油三脂含量检测手段获得了广泛的应用。本公司研制的甘油三脂检测试剂盒采用一种工作试剂,将甘油三脂的分解与甘油含量的测定合并到同一步骤。在此过程中染色剂氧化生成有色产物,在波长为570nm下检测,其颜色深浅程度与样品中甘油三脂的含量成正比。 产品特点 灵敏、准确:用10 μL样品。甘油三脂的线性检测范围为0.01-1.0 mmol/L (0.88 - 88.5 mg/dL)。 简单、快捷:整个测试过程只需加入一种工作试剂,并在室温下培养30分钟,也可用于高通量检测。 产品用途 1. 直接检测血清、血浆等生物样品中甘油三脂的含量。 2. 用于药品和药理学研究,检测药物对甘油三脂代谢的影响。 试剂盒规格(采用96孔板可测试100个样品) 缓冲液: 24 mL ATP: 250 μL 显色剂: 220 μL 混合酶:500 μL 脂肪酶: 500 μL 标准品: 100 μL(相当于100 mmol/L甘油三脂) 储藏条件:冷冻运输。 所有试剂于-20°C下保存,保质期3个月。 预防措施:本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。 检测步骤 注意:(1) 含有硫氢基的试剂(如:硫氢乙醇,DTT)可能影响检测,样品准备中避免此类物质。(2) 如果样品中含有甘油,可使用甘油检测试剂盒(Cat#EGLY-200),以确定甘油浓度,减去甘油值便得到甘油三酯浓度。 1、将所有试剂放置至室温,解冻后的混合酶和脂肪酶应置冰上或冰箱保存。用蒸馏水稀释过的标准品。稀释比例见下表: No | 标准品+H2O | Vol (μL) | 甘油三脂 (mmol/L) | 1 | 10 μL+ 990 μL | 1000 | 1.0 | 2 | 6 μL + 994 μL | 1000 | 0.6 | 3 | 3 μL + 997 μL | 1000 | 0.3 | 4 | 0 μL + 1000 μL | 1000 | 0 |
取透明平底96孔板,在孔中加入10 μL稀释后的标准品。 样品处理:检测前,血清和血浆样品需用蒸馏水稀释5倍,细胞和其它固体样品需用5%的曲通(Triton X-100)溶液溶解。 大多数样品(如血清和血浆)不含甘油,不需作样品的空白对照。若样品含有甘油,则需空白对照。 将10 μL样品(和10 μL作为空白对照的样品)分别放入96孔板的孔中。 2、取洁净试管,按如下每 反应孔的 比例,配制足量的工作试剂(和空白试剂)。工作试剂: 100 μL 缓冲液,2 μL混合酶, 5 μL脂肪酶,1 μL ATP, 1 μL染色试剂。 在标准品和样品孔中加入100 μL工作试剂。轻敲使其混合。 3、在室温下培养30分钟,在570nm下读取吸光度(550-585nm皆可)。 注意:如果样品的OD值大于1.0 mmol/L标准品的OD值,用蒸馏水稀释样品并再次检测,结果需乘稀释系数n。 浓度计算 用OD标准品 减去OD水(#4)得到△OD,以此对标准品浓度作图,测定其斜率。通过以下公式计算样品中甘油三脂的浓度: ODSAMPLE、ODH2O是样品和水(#4) 的吸光度,n 是稀释系数 (在血清和血浆样品中n = 5)。 单位换算:1 mmol/L 甘油三脂相当于88.5 mg/dL或10 ppm。 实验必需品(未提供) 透明平底96孔板、96孔板吸光率阅读仪、吸液仪器、离心管 |
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