酵母膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)

中文名称：酵母膜蛋白提取试剂盒(2D电泳用)
英文名称：Yeast membrane protein extraction kit (2D electrophoresis)
产品规格：50T|100T
跨膜蛋白承担各种生物功能，膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。
酵母膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。酵母膜蛋白提取试剂盒可以从各种酵母样本中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解酵母总膜组份，包括质膜、核膜和各种细胞器膜。
本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本不含有盐成分，可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验，请使用我公司其他货号的试剂盒。

储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液溶解液2-8℃保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制:本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新:我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照试剂盒中随产品附带的印刷版说明书，不能参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。
需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全:使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
2．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
3．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
4．最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
5．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
1．使用方便。
2．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材:
仪器:
●离心机 ● 振荡器 ● 移液器 ●冰箱 ●冰盒
耗材:
●离心管 ● 吸头
试剂:
● PBS

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1．提取液制备:
每500μl酵母蛋白提取液B中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】:
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取适量酵母培养物，在4℃，2500g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3．用冷PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．每100-200μl体积酵母沉淀物中加入500μl酵母蛋白提取液A，混匀后，在室温或37℃条件下轻轻振荡1-2小时。
5．在4℃，3000g条件下离心5-10分钟，移除上清，收集沉淀。
6．在沉淀物中加入500μl冷的(4℃)酵母蛋白提取液B，混匀。
7．在2-8℃条件下轻轻振荡30-45分钟。
8．将提取液在4℃条件下10000×g离心5分钟，取上清。
9．将上清在37℃水浴10分钟。
10．在37℃ 1000×g离心3分钟。
【注】:
● 无37℃条件离心也可室温离心，缩短离心时间至1-2分钟。
● 也可不离心，延长37℃水浴时间至液体澄清，分层明显即可。
11．此时溶液分为2层，小心移除上层部分，留下管底部下层部分大约30-50μl液体。
【注】:
● 下层为粘稠状液体。
12．用50-100μl膜蛋白溶解液溶解该下层溶液，即得酵母膜蛋白样品。
13．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】:
● 建议用BCA 法进行蛋白定量。相关产品:HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析:
●蛋白浓度低？
膜蛋白丰度较低，需要加大细胞上样量。处理部分细胞样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。各步骤处理时温度必须按照说明书要求的温度进行。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA 法。不适合用Bradford 法，因为试剂A中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！