组织/细胞RNA提取指南，彻底摆脱选择综合征！
核糖核酸（RNA），存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA的碱基主要有4种，即A（腺嘌呤）、G（鸟嘌呤）、C（胞嘧啶）、U（尿嘧啶），其中，U（尿嘧啶）取代了DNA中的T（胸腺嘧啶）。核糖核酸在体内的作用主要是引导蛋白质的合成。
图1.DNA和RNA的结构
RNA的分类
人体一个细胞含RNA约10pg（含DNA约7pg）。在细胞中，根据结构功能的不同，RNA主要分三类，即tRNA（转运RNA），rRNA（核糖体RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA含量低，占细胞总RNA的1%~5%。核糖体RNA特点含量高，占细胞总RNA的80%~85%。
表1：RNA的结构和功能
特殊RNA
随着高通量组学技术的应用，在高等哺乳动物中已发现高达数十万种非编码RNA，根据结构与功能可对其进行科学分类和系统命名，如tRNA、rRNA、snRNA、snoRNA、siRNA、miRNA、piRNA和lncRNA等。非编码RNA是当今生命科学发展最为迅速的前沿领域之一，它不断更新人们对生命本质的认识，为生物遗传育种及人类重大疾病的干预、防治和药物研究等提供全新的思路与技术(Amaral et al，2008)。
图2.非编码RNA的生物学功能（Cell. 2019 Nov 14; 179(5): 1033–1055.）
RNA研究的第一步为RNA提取，高质量的RNA是进行转录组测序、RT-PCR等试验的基础，然而由于RNA单链结构的不稳定性和无处不在的RNA酶，使得RNA在提取过程中容易发生降解，同时，传统的RNA提取方法毒性大，因此，提取出高质量的RNA，选择合适的提取产品非常重要！
动物组织细胞RNA提取
对于常规的新鲜或冻存的组织、贴壁细胞、悬浮细胞RNA提取，我们首推MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit 细胞/组织总RNA提取试剂盒19221ES，适用于10-20 mg动物组织或(1-5)×106个动物细胞的总RNA提取纯化。
产品特点
- RNA纯度高：配有基因组DNA吸附柱，可有效去除DNA污染；
- 安 全：无需有毒的酚、氯仿等有机物抽提；
- 快速简便：无需异丙醇或乙醇沉淀操，操作过程30 min完成；
- 使用方便：全流程室温操作，无需冰浴和低温离心。
产品性能
取106个杂交瘤细胞，分别使用19221和TRIzol（货号：10606ES）提取总RNA。之后测定浓度和琼脂糖凝胶电泳；同时取2 μL，使用Hifair® Ⅲ One Step RT-qPCR SYBR Green Kit（货号：11143ES）进行定量测试小鼠GAPDH。结果显示，MolPure® Cell/Tissue RNA Kit能稳定提取RNA，RNA产量高，完整度较好。
图 2.RNA 质量和浓度
图3.一步法反转录定量结果 （注：绿色为 19221，蓝色为 Trizol）
老师们可能会疑问为什么不首推Trizol或Trizol相关的产品呢？因为TRIzol有它固有的缺点：
- 有难闻的刺鼻气味
- 提取过程用到的酚、氯仿都为有毒有机物
- 提取时间长
如果老师们从成本的角度考虑，我们也有性能优异的Trizol提取产品。
MolPure® TRIeasy Plus Total RNA Kit总 RNA 提取试剂盒（带离心柱）19211ES是利用MolPure® RNA Column A1和改进的异硫氰酸胍/酚一步法（TRIzol法）来提取样品中的总RNA，适用于TRIzol法所能提取的所有样本，包括各种动植物、细菌和细胞样品。该试剂盒方便快捷，1 h完成可完成操作，且不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程。
产品特点
- 适用范围广：可通用动物、植物、细菌、细胞等样品
- 使用方便：“TRIzol+离心柱”形式，易于操作
- 快速简便：操作过程1 h完成
产品性能
取6×105左右个293T细胞，分别使用19211ES和竞品提取总RNA。之后测定浓度和琼脂糖凝胶电泳；结果显示，MolPure® TRIeasy Plus Total RNA Kit 19211ES能稳定提取RNA，RNA产量高，纯度和完整度较好。
图 4.RNA 质量和浓度
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasy™ 总RNA提取试剂 10606ES是一种适用于各种动植物、细菌组织、细胞的总RNA抽提试剂，具有极强的裂解能力，并有效抑制样本中RNA的降解，保持RNA的完整性。
TRIeasy™ LS Total RNA Extraction Reagent 液体总RNA提取试剂（同TRIzol LS）19201ES是一种适用于各种动植物、酵母、细菌等液体样本的总RNA抽提试剂，具有极强的裂解能力，并有效抑制样本中RNA的降解，保持RNA的完整性。
MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit细胞/组织miRNA提取试剂盒 19331ES适用于TRIzol法所能提取的所有样本，包括各种动植物、细菌组织和培养细胞中总RNA、miRNA和其他各种小RNA的提取。该试剂盒可选择提取包含miRNA的总RNA，或只针对microRNA富集，不包含>200 nt其它RNA，30min可完成单样本的提取。
