Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝胶试剂盒套装

 产品简介：

        常规的 Tris-SDS-PAGE 电泳只能分辨大分子蛋白，对于相对分子小的，尤其是 10 kD 以下的 蛋白分辨率极低。而 Tricine-SDS-PAGE 可以很好的分离分子在 1-10 kD 的蛋白及多肽，成为目前 电泳法变性分离多肽的主要方法。本产品包括 Tricine-SDS- PAGE 凝胶制备所需全套试剂，只需自 备蒸馏水，即可制备各种浓度的高质凝胶，方便、快捷，电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。

        本产品配套的蛋白 Marker 包含预染的 3 种多肽和 2 种低分子蛋白质组成，分子范围为 3.3kD-31.0kD，可,用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot 的转膜效果。Tricine甘油-SDS-PAGE 凝胶电泳时以及转移到 PVDF 或 NC 膜上可看到清晰的 5 条蓝色的蛋白条带。本品 为蛋白质和多肽混合物的冻干粉，种预染蛋白含约为 40µg，配有一支 1×上样缓冲液。

        本产品配套的 2x 上样缓冲液 (含 DTT)适用于 Tricine-SDS-PAGE 电泳时作蛋白质上样用。其主 要成份为 SDS，DTT，考马斯亮蓝，缓冲盐溶液等。考马斯亮蓝用作电泳时的指示剂，可大概指示 电泳结束的时间。

使用方法：

准备：

1. 本产品所提供的 PAGE 胶凝固剂为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制成 10% PAGE 胶凝 固剂溶液（0.1gPAGE 胶凝固剂加 1mL 双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可放置 4℃保存两周。

2. 电泳缓冲液：

（1）阴极缓冲液制备：取一包 10×Tris-tricine-SDS-PAGE 电泳缓冲液（阴极-）粉末充分溶解于 500mL 去离子水中，配成 10×Tris-tricine-SDS-PAGE 电泳缓冲液（阴极-）储存液，4℃保存备用，使用前稀 释 10 倍后使用。

（2）阳极缓冲液制备：根据用取适 10×Tris-tricine-SDS-PAGE 电泳缓冲液（阳极-），稀释 10 倍后使用。

3. 取出蛋白 Marker，溶于 200 µ1 配套的 1×上样缓冲液，可根据需要进行小分装，管 10 µl， -20℃贮存，次取一管使用，避免反复冻融。使用前取分装后的小管室温融化后即可上样电泳。

制胶：

根据目的蛋白分子大小选择合适的 PAGE 分离胶配制浓度，凝胶浓度配方参考附表。

I 配制分离胶

1. 将不同体积的双蒸水、49.5%T 6%C 、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。

2. 加入 10% PAGE 胶凝固剂和 PAGE 胶促凝剂，立即涡旋混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。

3. 在凝胶模具中迅速灌入适分离胶溶液（1 mm mini-gel，分离胶溶液加约 4 mL ），然后在分 离胶溶液上轻轻覆盖一层 1-3 cm 的水层，使凝胶表面保持平整。 4. 静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

II 配制夹层胶

1. 去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽吸去。

2. 将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。

3. 加入 10% PAGE 胶凝固剂和 PAGE 胶促凝剂，立即涡旋混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。

4. 将适的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面（对于 1 mm 的 mini-gel，夹层胶溶液加约 1 mL ）， 然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层，使凝胶表面保持平整。

5. 静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

III 配制浓缩胶

1. 去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。

2. 将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。

3. 加入 10% PAGE 胶凝固剂和 PAGE 胶促凝剂，立即涡旋混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。

4. 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

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