过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒 (微量法)-分析方法-资讯-生物在线

过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒 (微量法)

作者:北京索莱宝科技有限公司 2019-11-06T00:00 (访问量:5698)

测定意义:H2O2是生物体内最常见的活性氧分子,主要由SOD和XOD等催化产生,由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子

测定原理:H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在415nm有特征吸收。

 

过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒(微量法)

品牌:Solarbio | 货号:BC3595|规格:100T/96S 

 

注意:正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。 

规格:100T/96S

需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、丙酮、浓盐 酸、研钵和冰。

产品内容:

试剂一:丙酮 100mL×1 瓶,4℃保存;(自备)

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 3mL 浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂 4℃保存;

试剂三:液体 6mL×1 瓶,4℃保存; 试剂四:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;

标准品:液体 1mL×1 支,4℃保存,1mmol/mL H2O2标准液。



操作步骤:

一、H2O2提取:

1、细菌或细胞样品的制备: 收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一,超声 波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清, 置冰上待测。

2. 组织样品的制备: 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待 测。

3、血清(浆)样品:按照每 100μL 血清(浆)加入 0.9mL 试剂一的比例充分混匀;8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。


注意事项 1、由于试剂一易挥发,试剂一必须先预冷再加,研磨时必须在冰上研磨。 2、本试剂盒中试剂的挥发性较高,请带一次性手套和口罩。


二、测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 415nm,蒸馏水调零。

2、将试剂二、三和四 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。

3、如果用 96 孔板将则用丙酮将 1mmol/mL 标准液稀释为 2μmol /mL 的标准溶液,用微量玻璃比色 则用丙酮将 1mmol/mL 标准液稀释为 1μmol /mL 的标准溶液。

4、在 EP 管中按顺序加入下列试剂




加入试剂四溶解沉淀后(可先用丙酮清洗 3-5 次来洗去植物色素),室温静置 5min,取 200μL 转移至微量玻璃比色皿或 96 孔板中测定 415nm 处吸光值。对照管只要做一次即可。计算∆A 测定=A 测定管-A 对照管,∆A 标准=A 标准管-A 对照管。


三、H2O2含量计算:

1、按照细菌、细胞数量计算: H2O2含量(μmol/10 4cell)=∆A 测定÷(∆A 标准÷C 标液)×V 样本÷(500×V 样本÷V 提取) =0.004×∆A 测定÷∆A 标准。

2、按组织鲜重计算: H2O2含量(μmol/g 鲜重)=∆A 测定÷(∆A 标准÷C 标液)×V 样本÷(V 样本÷V 提取×W) =2×∆A 测定÷∆A 标准÷W。

3、按照蛋白浓度计算: H2O2含量(μmol/mg prot)=∆A 测定÷(∆A 标准÷C 标液)×V 样本÷(Cpr×V 样本) =2×∆A 测定÷∆A 标准÷Cpr。

4、按血清(浆)体积计算: H2O2含量(μmol/mL)= ∆A 测定÷(∆A 标准÷C 标液)×10 =20×∆A 测定÷∆A 标准。

500:细胞或细菌总数,万个;C 标液:H2O2标准溶液浓度,2μmol/mL;

V 样本:加入的样本 体积,0.25mL;W:组织鲜重,g;V 提取:提取过程中所用体积,1mL;

Cpr:样品蛋白浓度,mg/mL; 10:血清稀释倍数,[0.1mL 血清(浆)+0.9mL 试剂一] ÷0.1mL 血清(浆)=10。

注意:如果用微量玻璃比色皿(光径 d=1cm)将 1mmol/mL 标准液稀释为 1μmol /mL 的标准溶液。 计算公式亦作改变。

 

 

 

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